华中农业大学学报

作者：徐恩红，祁明普，项志杰，胡长敏，陈颖钰，陈建国，陈曦，郭爱珍

单位：1.华中农业大学动物医学院，武汉 430070;2.农业微生物资源发掘与利用全国重点实验室，武汉 430070;3.湖北洪山实验室，武汉 430070;4.湖北省兽医流行病学国际科技合作基地/农业农村部兽用诊断制剂创制重点实验室/ 农业农村部反刍动物生物制品重点实验室，武汉 430070

关键词：多联实时荧光定量PCR方法;牛呼吸疾病综合征;混合感染;牛支原体;多杀性巴氏杆菌;牛溶血性曼氏杆菌;多病原联合检测

基金：宁夏回族自治区重点研究发计划项目（2021BEF02028）；国家现代农业产业技术体系（肉牛/牦牛）专项（CARS-37）；湖北省重点研发计划项目（2020BBA055）

为了提高牛呼吸疾病综合征多病原混合感染的临床诊断效率，以牛支原体（Mycoplasma bovis，M.b）oppD/F基因、多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida，P.m）ompH基因、溶血性曼氏杆菌（Mannheimia haemolytica，M.h）gcp基因、牛传染性鼻气管炎病毒（infectious bovine rhinotracheitis virus，IBRV）gB基因、牛呼吸道合胞体病毒（bovine respiratory syncytial virus，BRSV）以及牛副流感病毒（bovine parainfluenza virus type，BPIV） 3型a和c基因型（BPIV-3a，-3c）的N基因等为检测靶标，分别设计特异性引物和Taqman探针，通过优化反应条件，采用3管7联的组合方式建立了7种病原体的多联实时荧光定量PCR检测方法。结果显示，该方法仅对本试验的7种病原有特异性反应，与其他常见病原无交叉反应。对M.b、P.m、M.h、IBRV、BRSV、BPIV-3a和BPIV-3c质粒标准品的最低检测限分别为102、102、101、102、102、102和101 拷贝/μL。组内变异系数小于2.5%，组间变异系数小于5.5%。平行应用该方法和常规PCR方法对临床采集的115份有呼吸道症状牛的鼻拭子进行检测，P.m阳性率36.65%，M.b阳性率27.83%，M.h阳性率25.22%，IBRV阳性率11.30%，BPIV-3c阳性率8.57%，BRSV阳性率0.95%；其中混合感染率为26.1%。共检测到11种混合感染模式，主要由M.b与其他病原体的混合感染，占72.7%（8/11）；M.b/P.m混合感染的检出率最高，占60%（18/30）；M.b、P.m、M.h在混合感染中出现率排前三，其占比分别为73.3%（22/30）、73.3%（22/30）和43.3%（13/30）；其次为IBRV，占26.7%（8/30）； BPIV-3c 占13.3%（4/30）。以上结果表明，该方法具有较高的分析敏感性和特异性，可用于牛呼吸疾病综合征多病原感染的联合检测。

来源：2023年第2期

《华中农业大学学报》期刊编辑部

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