华中农业大学学报

作者：张艳维，张永安，涂加钢

关键词：乌鳢水泡病毒; L蛋白; 原核表达; 多克隆抗体; 间接免疫荧光; 弹状病毒

基金：国家自然科学基金面上项目（31972832）

为研究L蛋白在乌鳢水泡病毒（snakehead vesiculovirus,SHVV）增殖过程中发挥的作用，扩增SHVV L基因的前900个碱基，将其克隆到载体pET-32a（+）中，构建原核表达质粒pET32a-L，并转化至大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞。设置不同温度、IPTG浓度及诱导时间，选择最佳的表达条件。通过NI-NTA亲和层析柱纯化蛋白，并利用纯化的蛋白免疫新西兰大白兔，制备多克隆抗体。用Western blot鉴定抗体特异性，间接免疫荧光观察L蛋白在SHVV感染斑点叉尾鮰卵巢细胞（channel catfish ovary,CCO）中的定位情况。结果显示，纯化的L蛋白分子质量约42 ku，与预期大小相符。制备的L蛋白多克隆抗体可以与 L蛋白发生特异性免疫反应，且L蛋白主要定位在细胞质，表明L蛋白多克隆抗体制备成功。

来源：2021年第4期

《华中农业大学学报》期刊编辑部

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