华中农业大学学报

作者：张齐，张星星，钟发钢，王金泉，张小莺

关键词：C反应蛋白（CRP）; 单域抗体; 噬菌体展示技术; 原核表达; 生物淘选

基金：国家自然科学基金面上项目（31873006; 31572556）； 乌鲁木齐市科技计划项目（P16130001）； 省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室优秀中青年人才培养引导计划专项（SKLSGIHP2017A03）

以CRP为免疫原免疫双峰驼后分离外周血淋巴细胞，提取总RNA后经逆转录制备cDNA，通过巢式PCR实验获得目的基因片段并克隆至噬菌体T7载体臂上，构建原始噬菌体库。随后进行4轮生物淘选，通过Phage-ELISA鉴定淘选后的噬菌体库，BamHⅠ、HindⅢ 双酶切构建了pET-28a与阳性克隆的重组质粒，转化入BL21菌株中进行低温诱导表达。经过His-镍离子亲和层析柱纯化获得单域抗体，然后再用间接ELISA鉴定单域抗体与CRP的反应性。研究结果显示，试验成功构建了库容为1.08×108 cfu的抗CRP单域抗体噬菌体库，基因插入率为96.43%（27/28）。生物淘选获得了4株与CRP特异性结合的阳性克隆，4株阳性克隆表达载体构建成功，并在BL21细胞中成功表达单域抗体，分子质量约为22 ku。经ELISA鉴定，4个抗体均显示出高亲和力与特异性，其中V2与V3的抗体效价高达1∶3 200，证明该抗体能够适用于实际检测方法开发。

来源：2020年第4期

《华中农业大学学报》期刊编辑部

查看华中农业大学学报杂志2020年第4期