华中农业大学学报

作者：张露珊，董靖，周顺，刘永涛，胥宁，杨秋红，艾晓辉

关键词：无乳链球菌; 分选酶A; 催化活性; 靶标; 荧光共振能量转移; 活性检测

基金：国家重点研发计划项目（2019YFD0900104）； 国家自然科学基金项目（31702368）

以提取的无乳链球菌ATCC51487菌株全基因组为模板，通过PCR扩增出srtAΔN82基因，经EcoRⅠ和XhoⅠ 双酶切、抗性筛选等方法构建重组表达载体，测定不同诱导温度、诱导剂浓度及诱导时间对表达产物的影响，利用亲和层析和离子交换层析纯化蛋白，并使用荧光共振能量转移法测定蛋白活性。结果显示,试验构建的 pGEX-6p-1-srtAΔN82载体转化至 BL21（DE3）后,在37℃条件下经1 mmol/L IPTG诱导表达6 h 后可得到大量的可溶性蛋白，且纯度大于 85%。纯化后的SrtAΔN82与底物作用后，可显著提高反应体系的荧光强度，表明得到的SrtAΔN82具有较好的生物学活性。

来源：2020年第4期

《华中农业大学学报》期刊编辑部

查看华中农业大学学报杂志2020年第4期