华中农业大学学报

作者：周鹏

关键词：希金斯刺盘孢; 农杆菌介导转化; 突变体; 致病性; 插入位点

基金：国家自然科学基金项目（31101399）

以希金斯刺盘孢菌株Ch-1为供试野生型菌株，通过农杆菌介导转化方法获得含2 000个转化子的T-DNA插入突变体库，筛选菌落生长异常或致病缺陷突变体，分析致病缺陷突变体的T-DNA 插入拷贝数和位点。结果显示，筛选到14株菌落异常突变体，包括2株生长缓慢突变体Ch-1-E393和Ch-1-C135、12株菌落形态异常突变体（包括色素异常、菌落扇变或菌丝坍塌现象），另外筛选到1株致病缺陷突变体Ch-1-G090。致病性测定结果表明，致病缺陷突变体Ch-1-G090接种拟南芥后，叶片发病明显减弱，且未产生水渍状病斑。显微观察发现该突变体分生孢子在叶片上仅能产生少量初生菌丝，不能正常形成次生菌丝。Southern 杂交显示，致病缺陷突变体Ch-1-G090为T-DNA双拷贝插入；通过Inverse-PCR法获得插入T-DNA的侧翼序列，明确该突变体T-DNA插入位点分别为假定蛋白（Ch063_10682）和RNA加工蛋白FCF1（CH063_10671）编码区。

来源：2019年第4期

《华中农业大学学报》期刊编辑部

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